補體法

1．材料

（1）免疫血清 60℃ 滅活 20 min，用 Kolmers 鹽水作 2 倍稀釋成 1：2，1：4，1：8……。補體用 1：10 稀釋的新鮮豚鼠血清，抗補體熒光抗體等，按下述的補體法染色。免疫血清補體結合的效價，如為 1：32 則免疫血清應作 1：8 稀釋。

（2）補體用新鮮豚鼠血清一般作 1：10 稀釋或按補體結合反應試管法所測定的結果，按 2 單位的比例，用 Kolmers 鹽水稀釋備用。Kolmers 鹽水配法：即在 pH7.4、0.1mol/L 的磷酸緩沖鹽水中，溶解 MgSO4 的含量為 0.01% 濃度。

（3）抗補體熒光抗體：在免疫血清效價為 1：4，補體為 2 單位的條件下，用補體染色法測定免疫豚鼠球蛋白熒光抗體的染色效價，然后按染色效價 1：4 的濃度用 Kolmers 鹽水稀釋備用。

2．方法步驟

（1）涂片或切片固定。

（2）吸取經適當稀釋之免疫血清及補體之等量混合液（此時免疫血清及補體又都稀釋一倍）滴于切片上，37℃ 作用 30 min，置于保持一定濕度的染色盒內。

（3）用緩沖鹽水洗 2 次，攪拌，每次 5 min，吸干標本周圍水液。

（4）滴加經過適當稀釋之抗補體熒光抗體 30 min，37℃，水洗同（3）。

（5）蒸餾水洗 1 min，緩沖甘油封固。

3．對照染色

（1）抗原對照。

（2）抗血清對照：用正常兔血清代替免疫血清。

（3）滅活補體對照：將補體經 56℃30 min 處理后，按補體同樣比例稀釋，與免疫血清等量混合后，進行補體法染色。

本法之熒光抗體不受免疫血清的動物種屬的限制，因而一種熒光抗體可作更廣泛的應用，敏感性亦較間接法高，效價低的免疫血清亦可應用，節　省免疫血清，尤其是對檢查形態小的如立克氏體、病毒顆粒等或濃度較低的抗原物質時甚為理想。