客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。
產品名稱 | |
英文名稱 | Neospora caninum |
貨號 | YSP97003 |
熒光定量PCR試劑盒技術:
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
人中性粒細胞防御素1-3(HNP1-3)ELISA試劑盒英文名稱:Human neutrophil peptide 1-3,HNP1-3 ELISA Kit進口/分裝
人中性粒細胞堿性酸酶(NAP)ELISA試劑盒英文名稱:Human neutrophilic alkaline phosphatase,NAP ELISA Kit進口/原裝
人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒英文名稱:Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit*
SOD(Human Super Oxidase Dimutase) 人超氧化物歧化酶Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-DRD2 多巴胺受體D2抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Neurexin 2 軸突蛋白2抗體 規格 0.2ml
human thyroid stimulating immunoglobulin,TSI ELISA Kit 人甲狀腺刺激免疫球蛋白 96T
C17orf77 英文名稱: 17號染色體開放閱讀框77抗體 0.2ml
Anti-OPG 骨保護蛋白/護骨素抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
MV(Human morbillivirus) ELISA Kit 人麻疹病毒Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-IRS-3 胰島素受體底物-3抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh LEO1 RNA聚合酶相關蛋白LEO1抗體 規格 0.1ml
DHEA-S(Human Dehydroepiandrosterone sulfate) ELISA Kit 人脫氫表雄酮酯 96T
Piwil2 英文名稱: piwi樣2蛋白抗體 0.2ml
IκB β 單克隆抗體IκB β Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ulInsulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP-4 ELISA Kit
大鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat B(INH-B)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Agarose常溫100g
瓊脂糖Agarose4℃保存100g
瓊脂粉Agar,Powder-20℃保存100g
松Hydrocortisone 5g
青霉素G鈉鹽溶液Penicillin G Sodium Solution-20 ℃避光保存10mL 鳶尾黃素;鳶尾黃酮;鳶尾苷元Tectorigenin548-77-620mgHPLC≥98%
芫花素;芫花黃素Genkwanin437-64-920mgHPLC≥98%
原阿片堿;雙花母草素;全能花素;原阿片鹼Protopine130-86-920mgHPLC≥98%
原兒茶醛;3,4-二羥基protocatechuic aldehyde139-85-520mgHPLC≥98%
原兒茶酸;瑞炎寧;3,4-二羥基苯甲酸protocatechuic acid99-50-320mgHPLC≥98%
原花青素proanthocyanidins4852-22-620mgUV≥98%
原花青素B1;原矢車菊B1Procyanidin B120315-25-720mgHPLC≥97%
原花青素B2;原矢車菊素B2Procyanidin B229106-49-820mgHPLC≥98%
原人參二醇Protopanaxdiol213849920mgHPLC≥98%
原人參三醇Protopanaxatriol1453-93-620mgHPLC≥98%
大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-Ⅰ ELISA Kit
大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Tumor necrosis factor soluble receptor ?
信號傳導蛋白SMAD3 單克隆抗體Smad3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul
CaMKIIβ/γ/δ (Phospho Thr287) 單克隆抗體CaMKIIβ/γ/δ (Phospho Thr287) Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul
熱休克蛋白22 單克隆抗體HSPB8/HSP22 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul
轉鐵蛋白 單克隆抗體Transferrin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul
轉鐵蛋白 單克隆抗體Transferrin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul
犬新孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒卷曲螺旋結構域蛋白83抗體UCP-3/FITC 熒光素標記線粒體脫偶連蛋白3抗體IgG100 ul
卷曲螺旋結構域蛋白21抗體UG/FITC 熒光素標記子宮珠蛋白抗體IgG100 ul
卷曲螺旋結構域蛋白6抗體(狀甲狀腺癌編碼蛋白)UMOD/FITC 熒光素標記UMOD抗體IgG100 ul
細胞周期素依賴激酶2相關蛋白2抗體ULBP1/N2DL1/FITC 熒光素標記兔抗、大、UL16結合蛋白1蛋白抗體IgG500 ul
1號染色體開放閱讀框201抗體ULBP2/N2DL2/FITC 熒光素標記兔抗、大、UL16結合蛋白2抗體IgG100 ul
卷曲螺旋結構域蛋白7抗體ULBP3/N2DL3/FITC 熒光素標記兔抗、大、UL16結合蛋白3抗體IgG100 ul
卷曲螺旋結構域蛋白80抗體UMOD/FITC 熒光素標記UMOD蛋白抗體IgG100 ul
CD163蛋白樣1抗體URGCP/URG4/FITC 熒光素標記型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗體IgG100 ul
周期素依賴性激酶5調節蛋白1樣蛋白1抗體URGCP/URG4/FITC 熒光素標記型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗體C端IgG100 ul
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。