樣品RNA的抽提:
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
產品名稱 | |
英文名稱 | B Virus(BV)B |
貨號 | YSP96399 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
熒光定量PCR試劑盒技術:
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。
高藜蘆酸(標準品)C37H42N2O6(S,S)-(+)-2,二甲氧基-1,雙(二甲氨基)丁烷
PD0325901C31H46O5碳酸肼
西他塞坦鈉/司他生坦鈉C9H12O32,2'-雙(2-)-4,4',5,5'-四基-1,2'-聯咪唑[光聚合引發劑]
西他塞坦鈉/司他生坦鈉C21H20NO6.Cl5'-氯-羥基-2'-甲基-2-萘
西他塞坦鈉/司他生坦鈉C27H34O12呋喃酮乙酸酯
輪環藤寧四乙酸/1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸C8H8O3(+)-二乙?;?D-
拉米夫定C8H8O3磺酸酐
拉米夫定(標準品)C6H6O3Nα-[(9H-芴-9-氧基)羰基]-L-蘇氨酸叔丁酯
鹽酸三氟拉C11H10O4α-基肉桂酸乙酯
鹽酸三氟拉(標準品)C11H14O41-氯-2,5-二乙氧基
皮質甾酮/腎上腺酮C30H30O8甲?;?β-氨酸
皮質甾酮(標準品)C42H70O122,6-二氯并噻唑
二硫化四乙基秋蘭姆C10H8O33,5-二氟甲
雙硫侖(標準品)C7H8O2乙基氯化鎂
楊梅素/楊梅酮C11H10O3(R)-哌-2-羧酸
楊梅素/楊梅酮(標準品)C8H15NO2氨甲酰基-5-氟基酸
去氧膽酸C44H58O5酸鎘
β-環糊精C30H46O3氨基-2,5-二酚
皰疹病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素1受體相關激酶1(IRAK1)ELISA試劑盒phospho-c-Jun/AP-1(Thr91+Thr93) 酸化原癌基因c-Jun抗體500 ul
白介素1受體拮抗劑(IL1Ra/CD121)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser73) 酸化原癌基因c-Jun抗體1 Pack
白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser243) 酸化原癌基因c-Jun抗體300 ul
白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Thr93) 酸化原癌基因c-Jun抗體300 units
白介素1β前體(pro-IL1B)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser63) 酸化原癌基因c-Jun抗體1 Kit
白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒Jun B 活化蛋白激酶B抗體100 ul
白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒Jun D 活化蛋白激酶D抗體100 ul
白介素18結合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒CK I alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶抗體100 ul
白介素18(IL-18)ELISA試劑盒CK II Alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶抗體100 ul