實驗通用規則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

儀器：

1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為550nm）

2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）

3、臺式離心機

4、漩渦混勻器

5、微量移液器

樣本收集與前處理：

血清（漿）可直接測定。

紅細胞：需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。

動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。

培養細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。

具體的樣本前處理：參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

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測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時不能產生氣泡

2.溫

1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。

2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。

2-異 97%小鼠脂酶A2(PL-A2)免疫試劑盒芳香硫酯酶家族蛋白1抗體SULT1A1  芳磺轉移酶1抗體

S(-)-2--1-丁 98%小鼠烯式酮羧激酶(PCK)免疫試劑盒腫瘤抑制相關蛋白PHEMX抗體Sulfatase 2  硫酯酶2蛋白抗體

D-脯氨酯鹽鹽 97%小鼠肌3激酶(PI3K)免疫試劑盒精神分裂癥與犰狳重復因抗體Sulfatase 1  硫酯酶1抗體

吡啶-N-氧化物 95%小鼠化腺苷活化蛋白激酶(pAMPK)免疫試劑盒乙脫氫酶1型抗體SUGT1  SUGT1蛋白抗體

(S)-(-)-1, 2, 4-丁三 98%小鼠化外信號調節激酶(pERK)免疫試劑盒化乙酰輔酶A羧化酶抗體SUFU/Suppressor of Fused  抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體

L-絲氨乙酯鹽鹽 99%小鼠化酪氨蛋白激酶JAK3(pJAK3)免疫試劑盒化乙酰輔酶A羧化酶抗體Substance P Receptor/NK1R  P物質受體抗體

D-色氨 97%小鼠化核因子-κB(p-NF-κB)免疫試劑盒化腺苷三結合盒轉運體A1抗體Substance P  P物質抗體

1-(2,4,6-三異磺酰)咪唑  98%小鼠化蛋白激酶C(P-PKC)免疫試劑盒化鐵調節蛋白1抗體Styk1  絲氨/蘇氨/酪氨激酶STYK1抗體

L-纈氨乙酯鹽鹽 98%小鼠化蛋白激酶B(P-PKB)免疫試劑盒化鐵調節蛋白1抗體STXBP1/Munc18  神經突觸前膜胞內蛋白18抗體

N-α-芐氧羰-L-2,4-二氨丁 99%小鼠化表皮生長因子受體(pEGFR)免疫試劑盒化乙酰輔酶A羧化酶抗體streptomycin  鏈霉素抗體

防擴散逆止閥 NN-62726.090小鼠化氨末端蛋白激酶(P-JNK)免疫試劑盒膜粘連蛋白6抗體Streptokinase  鏈激酶抗體

2-乙酯 98%小鼠淋巴趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)免疫試劑盒錨蛋白重復結構域蛋白42抗體Streptococcus suis 2  小鼠抗2型豬鏈球菌菌體蛋白抗體

5,6-二并咪唑(5,6-DBI) 99%小鼠淋巴功能相關抗原3(LFA-3/CD58)免疫試劑盒胞環蛋白肌動蛋白結合蛋白抗體Streptococcus suis 2  2型豬鏈球菌菌體蛋白抗體

 96% 小鼠亮氨腦啡肽(Leu-ENK)免疫試劑盒腺病5結合蛋白BS69抗體(骨形態發生蛋白受體相關分子1)Streptavidin/SA protein  鏈酶親和素抗體

 99%小鼠鏈球菌(SK)抗體(IgG)免疫試劑盒載脂蛋白A1抗體Stra8  視黃激活因8抗體
谷氨酸脫氫酶（GDH）

成纖維生長因子受體3抗體IL-10/FITC   熒光素標記白介素10抗體IgG

FAM71D蛋白抗體IL-10R/CD210/FITC  熒光素標記白介素-10受體抗體IgG